rTEV蛋白酶 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：rTEV Protease
作用机制：一种特异性蛋白酶，可识别并切割特定的氨基酸序列（如ENLYFQ↓G），常用于去除重组蛋白上的标签（如SUMO标签、GST标签等），获得天然状态的目标蛋白质。

适用样本：适用于带有TEV蛋白酶识别位点的重组蛋白的纯化后处理，样本为经过亲和层析纯化的带有标签的重组蛋白溶液。
产品概述
重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经基因工程改造、在大肠杆菌中重组表达的半胱氨酸蛋白酶，保留天然TEV酶功能的同时，在更广温度范围具备更强稳定性与特异性。它是切除融合蛋白亲和标签的常用工具酶，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点精准位于谷氨酰胺与甘氨酸/丝氨酸之间，最常见识别序列为Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。该酶最佳活性条件为pH7.0、30℃，但在pH6.0-8.5、温度4-30℃范围内均有活性，可根据目的蛋白特性灵活调整反应条件。其N端带6×His标签，切割后可通过Ni-NTA树脂去除，以获得高纯度目的蛋白。
产品特点
高特异性切割：严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，精准切割谷氨酰胺与甘氨酸/丝氨酸之间的肽键，避免非特异性剪切。

活性稳定范围广：最佳反应条件为pH7.0、30℃，但在pH6.0-8.5、温度4-30℃范围内均保持活性，适配不同蛋白特性。

易去除纯化：N端带6×His标签，反应后可通过Ni-NTA树脂便捷去除，不影响目的蛋白纯度。

高纯度低残留：经基因工程改造，纯度达99%，宿主gDNA残留远低于1copies/U，降低外源污染风险。
操作步骤

一、试剂预处理

取出洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ浓缩液，按试剂瓶标注比例加入无水乙醇，充分混匀后备用

将洗脱液置于65℃水浴锅中预热

二、水样处理与核酸富集

取10mL预处理后的水样（杂质较多的水样需先经0.45μm滤膜过滤）加入50mL洁净烧杯

依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液，充分搅拌混匀

将烧杯置于65℃水浴中孵育15分钟，期间每隔5分钟搅拌一次

三、核酸纯化与洗脱

向烧杯中加入15mL异丙醇，充分搅拌混匀后，将混合液转移至连接富集吸附柱的50mL注射器针筒内

静置2分钟后，开启真空抽滤装置，将液体缓慢抽滤至富集吸附柱内（注意不要抽干）

向针筒内加入5mL洗涤液Ⅰ，静置2分钟后抽滤；再加入5mL洗涤液Ⅱ，静置2分钟后抽滤，重复洗涤液Ⅱ步骤1次

取下富集吸附柱，放入收集管中，12000rpm常温离心3分钟，去除残留洗涤液

将吸附柱转移至新的收集管，加入50-100μL预热的洗脱液，静置2分钟后12000rpm离心2分钟

收集管中的液体即为纯化后的病毒核酸，可直接用于下游实验或-70℃保存

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注意事项

试剂保存：试剂盒应避光保存于2-8℃，有效期12个月；核酸富集因子避免反复冻融，使用后立即放回冰箱

水样预处理：高浊度或杂质过多的水样，需先经0.45μm滤膜过滤，避免堵塞吸附柱

操作规范：实验全程佩戴手套、口罩、护目镜等防护用品，避免直接接触水样与试剂；若不慎接触皮肤或眼睛，立即用大量清水冲洗

试剂配制：洗涤液需现用现配，按比例加入无水乙醇后充分混匀，未使用的稀释液可在2-8℃保存1个月

核酸保存：提取的核酸若长期保存，需置于-70℃环境，避免反复冻融；短期可在4℃保存24小时

器材要求：所有实验器材需为无RNA酶耗材，实验前可经180℃干烤6小时或用RNA酶清除剂处理