探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

基本信息‌

‌中文名称‌：探针法荧光定量PCR试剂盒

货号：P-PR1424

规格：100反应、200反应、500反应

‌英文名称‌：Probe-based Quantitative PCR Kit
作用机制：利用与靶序列特异性结合的荧光探针，在PCR扩增过程中，探针被Taq酶的5'核酸外切酶活性切割，释放荧光信号，通过检测荧光强度的变化实现对靶基因的定量分析。 

适用样本：各类核酸样本，适用于基因表达定量、病原体定量检测等。
产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR（qPCR）技术开发，通过荧光标记的特异性探针实时监控PCR反应过程，结合配套软件可对待测样品模板的初始浓度进行精准分析。产品兼具高灵敏度与强特异性，支持定性检测和绝对定量分析，适用于基因表达研究、病原体检测、SNP分型等多种科研场景。

产品组成（以50次20μL反应装为例）

组分名称 规格 说明

2×探针法qPCR预混液 500μL 含热启动Taq酶、dNTPs等核心成分

荧光PCR专用模板稀释液 1mL 用于稀释阳性对照和样品模板

qPCR引物混合液 100μL 针对靶标保守序列设计合成

qPCR探针 50μL 标记荧光基团与淬灭基团

阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） 50μL 无传染性DNA片段，用于构建标准曲线

使用手册 1份 含操作流程与注意事项

产品特点

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应，可有效避免假阴性结果

强特异性：引物及探针针对靶标保守序列设计，与非靶标核酸无交叉反应

双重检测模式：支持绝对定量（线性范围≥5个数量级）和定性分析两种模式

即开即用：用户仅需提供核酸模板，无需自行配制复杂反应体系

防污染设计：一管式闭管操作，降低扩增产物泄漏导致的交叉污染风险

操作步骤

标准曲线制备（定量分析专用）

标记6个离心管，编号为2-7

每管加入45μL荧光PCR专用模板稀释液

在7号管中加入5μL阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准品

依次倍比稀释至2号管，最终得到1×10²-1×10⁷拷贝/μL的6个梯度标准品

所有标准品置于冰上备用

样品核酸制备

建议设置阴性对照（超纯水）和阳性对照（阳性对照1000倍稀释液）

使用市售核酸提取试剂盒纯化样品DNA/RNA，操作过程避免交叉污染

用分光光度计或Qubit测定核酸浓度，统一稀释至10-100ng/μL

qPCR反应体系配制（20μL体系）

在冰上按以下比例配制反应液：

试剂组分 体积/反应

2×探针法qPCR预混液 10μL

qPCR引物混合液 2μL

qPCR探针 1μL

模板核酸（样品/标准品） 2μL

超纯水 5μL

上机扩增程序

预变性：95℃ 5分钟（激活热启动酶）

PCR循环（40个循环）：

变性：95℃ 15秒

退火延伸：60℃ 1分钟（采集荧光信号）

数据分析

定量分析：以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，通过待测样品Ct值计算初始模板浓度

定性分析：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且有典型扩增曲线；待测样品Ct≤35判为阳性，Ct≥40判为阴性，35-40之间需重复实验确认

注意事项

分区操作：样品处理、试剂配制、加样需在独立实验区域进行，避免交叉污染

试剂保存：所有组分需在-20℃避光保存，避免反复冻融；使用前需自然融化并充分混匀

耗材使用：全程使用无菌无酶的吸头和离心管，操作过程避免气泡产生

污染防控：实验后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面，扩增产物需按生物安全要求处理

结果判定：基因突变可能导致假阴性结果，交叉污染可引发假阳性，需结合实验背景综合判断

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