2X T4 DNA Ligase 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：2X T4 DNA Ligase
作用机制：T4 DNA连接酶可催化DNA链的5'-磷酸基团和3'-羟基基团之间形成磷酸二酯键，从而将双链DNA片段连接起来。2×浓度的预混液含有连接酶、缓冲液等成分，使用时只需加入DNA片段即可进行连接反应。

适用样本：适用于DNA克隆实验，如粘性末端连接、平末端连接、载体构建等，样本为限制性内切酶酶切后的DNA片段、PCR产物等。
产品概述
2XT4 DNA Ligase即2×浓度的T4 DNA连接酶，是分子克隆中常用的DNA连接工具酶，来源于T4噬菌体。它能够催化双链DNA片段末端的磷酸二酯键形成，将互补的粘性末端或平末端的DNA片段连接起来，广泛应用于基因克隆、载体构建、DNA片段拼接等实验。该酶经过浓度优化，2×浓度的配方可减少反应体系中酶的添加体积，降低对反应体系的影响，同时保证连接效率。T4 DNA连接酶需要ATP作为辅助因子，在合适的缓冲体系与温度条件下（通常16℃过夜连接或22℃连接数小时）可高效完成连接反应，是分子生物学实验室中不可或缺的基础试剂之一。
产品特点
高浓度配方：2×浓度T4连接酶，减少反应体系中酶的添加量，降低对反应体系的影响。

广谱连接能力：可连接粘性末端、平末端、切口DNA，适配各类分子克隆需求。

快速连接反应：22℃孵育1-2小时即可完成连接，比常规T4连接酶反应时间缩短50%。

活性稳定：-20℃保存稳定性高，反复冻融不影响酶活性，实验重复性好。
操作步骤

.配制反应体系：（以25μl体系为例）

组分 体积

10×反应缓冲液 2.5μl

MgCl₂（25mM） 1.5-2.5μl（根据模板调整）

dNTPs（10mM each） 0.5μl

上游引物（10μM） 1μl

下游引物（10μM） 1μl

模板DNA 1-5μl

3173 DNA Polymerase 0.2-0.5μl

ddH₂O 补至25μl

.PCR扩增：设置循环参数 95℃预变性3min；95℃变性30s，50-65℃退火30s，72℃延伸（1min/kb），25-35个循环；72℃终延伸10min

.产物处理：扩增产物需添加Loading Buffer后进行1%琼脂糖凝胶电泳

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注意事项

试剂预处理：使用前需按照瓶身标签提示，向漂洗液中加入指定体积的无水乙醇

沉淀处理：若裂解液、结合缓冲液出现沉淀，可在37℃水浴中加热溶解，摇匀后再使用

操作环境：实验需在洁净环境中进行，避免样本交叉污染；所有离心步骤均在室温下完成

试剂保存：试剂盒未开封时，可在15~25℃干燥环境下保存12个月；开封后蛋白酶K需置于-20℃保存，避免反复冻融

安全防护：若试剂接触皮肤或黏膜，需立即用大量自来水冲洗