T4 DNA Ligase（T4连接酶） 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：T4 DNA Ligase
作用机制：催化DNA链的5'-磷酸基团与3'-羟基基团之间形成磷酸二酯键，可连接粘性末端、平末端的DNA片段，也可修复双链DNA的缺口，是分子克隆实验中常用的工具酶。

适用样本：适用于DNA克隆、载体构建、DNA片段连接等分子生物学实验，样本为限制性内切酶酶切后的DNA片段、PCR产物、合成的寡核苷酸等。
产品概述
T4 DNA连接酶是从T4噬菌体感染的大肠杆菌中分离得到的一种DNA连接酶，是分子克隆实验中最常用的工具酶之一。它能够催化双链DNA片段末端的5'磷酸基团与3'羟基之间形成磷酸二酯键，从而将互补的粘性末端或平末端的DNA片段连接起来。T4 DNA连接酶需要ATP作为能量辅助因子，在合适的缓冲体系中，于16℃（粘性末端）或22℃（平末端）条件下可高效进行连接反应。它广泛应用于基因克隆、载体构建、DNA片段拼接、基因组文库构建等多种分子生物学实验，是实现DNA片段体外重组的关键酶类，为分子生物学研究提供了不可或缺的技术支持。
产品特点
经典连接工具：分子克隆实验室标准连接酶，技术成熟，结果稳定可靠。

广谱连接能力：可连接粘性末端、平末端、切口DNA，适配各类分子克隆操作。

活性可控：16℃过夜连接为常规条件，22℃连接2-3小时可快速完成反应。

经济性高：价格低廉，性价比高，适合大规模常规克隆实验。
操作步骤

.配制反应体系：（以25μl体系为例）

组分 体积

10×反应缓冲液 2.5μl

MgCl₂（25mM） 1.5-2.5μl（根据模板调整）

dNTPs（10mM each） 0.5μl

上游引物（10μM） 1μl

下游引物（10μM） 1μl

模板DNA 1-5μl

3173 DNA Polymerase 0.2-0.5μl

ddH₂O 补至25μl

.PCR扩增：设置循环参数 95℃预变性3min；95℃变性30s，50-65℃退火30s，72℃延伸（1min/kb），25-35个循环；72℃终延伸10min

.产物处理：扩增产物需添加Loading Buffer后进行1%琼脂糖凝胶电泳

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注意事项

试剂预处理：使用前需按照瓶身标签提示，向漂洗液中加入指定体积的无水乙醇

沉淀处理：若裂解液、结合缓冲液出现沉淀，可在37℃水浴中加热溶解，摇匀后再使用

操作环境：实验需在洁净环境中进行，避免样本交叉污染；所有离心步骤均在室温下完成

试剂保存：试剂盒未开封时，可在15~25℃干燥环境下保存12个月；开封后蛋白酶K需置于-20℃保存，避免反复冻融

安全防护：若试剂接触皮肤或黏膜，需立即用大量自来水冲洗