5‘ DNA 腺苷化试剂盒 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：5' DNA Adenylation Kit
作用机制：利用T4 RNA连接酶或其他腺苷化酶，在DNA分子的5'末端添加腺苷（A），使DNA分子5'端带上A尾；腺苷化的DNA可用于与T载体连接，实现快速克隆。 

适用样本：平末端DNA片段，适用于TA克隆、基因文库构建等实验。
产品概述
5‘ DNA 腺苷化试剂盒是一款用于在DNA片段5'末端添加腺苷酸（A）的试剂盒，在分子克隆与DNA修饰中具有重要应用。该试剂盒包含腺苷化酶、反应缓冲液、ATP等组分，腺苷化酶可催化ATP中的腺苷酸转移到DNA片段的5'末端，使5'末端带有单腺苷酸突出。5'腺苷化的DNA片段可与带有3'胸腺嘧啶（T）突出的T载体进行TA克隆，实现高效连接。此外，5'腺苷化还可用于DNA的标记、功能化修饰等场景。试剂盒操作简便，反应条件温和，腺苷化效率高，可用于多种类型的DNA片段（如PCR产物、酶切产物等）的腺苷化修饰，为DNA片段的后续克隆或修饰提供了便捷的工具。
产品特点
高效腺苷化反应：在DNA片段5'末端添加单腺苷酸（A），效率≥95%，适合TA克隆。

平末端DNA适配：可对平末端PCR产物、酶切产物进行腺苷化处理，转化为粘性末端。

反应条件温和：37℃孵育30分钟即可完成反应，无需特殊试剂。

下游兼容：腺苷化后的DNA可直接与T载体连接，克隆效率≥90%。
操作步骤

样本处理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取试剂，再加入500μl血清或血浆样本，漩涡振荡30秒充分混匀

初步分离：13000rpm离心5分钟，将上清约1ml转移至新的2ml EP管中，加入1ml异丙醇，上下颠倒混合均匀

柱式吸附：将混合液分三次加入吸附柱（每次约700μl），13000rpm离心15秒，倒掉过柱液

洗涤纯化：

向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液

向吸附柱中加入500μl无水乙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液

干燥柱体：吸附柱13000rpm空离心2分钟，去除残留乙醇，室温放置2分钟使乙醇完全挥发

RNA洗脱：在吸附柱滤芯中央加入30μl RNase-Free TE缓冲液，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，收集滤液即为提取的miRNA产物

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注意事项

样本处理：

血浆抗凝剂建议使用EDTA或柠檬酸钠，避免使用肝素（会抑制PCR检测）

样本应避免反复冻融，新鲜样本建议尽快处理

试剂使用：

miRNA提取试剂含有胍盐，具有强烈腐蚀性，操作时需佩戴防护眼镜、手套和口罩

自备试剂需确保无RNase污染，避免影响RNA完整性

实验操作：

所有操作需在无RNase环境中进行，使用RNase-Free的枪头和离心管

离心过程需确保离心管盖紧，避免液体渗漏

产物检测：

由于血清/血浆中miRNA含量极低，提取产物浓度通常在5ng/μl以下，难以用常规NanoDrop测量，建议直接取10μl进行下游反转录实验

为获得更可靠数据，推荐使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA定量检测

产物保存：提取的miRNA产物可立即用于下游实验，或分装后置于-80℃长期保存，避免反复冻融