Hi T7 RNA Polymerase 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：Hi T7 RNA Polymerase
作用机制：一种高活性的T7 RNA聚合酶，可在体外以线性化的DNA模板为模板，高效合成RNA；具有高转录活性与特异性，可合成各种长度的RNA分子；适用于基因功能研究、疫苗研发等实验。 

适用样本：克隆有T7启动子的线性化DNA模板，适用于体外合成mRNA、siRNA、lncRNA等。
产品概述
Hi T7 RNA聚合酶是一种经过基因工程改造与纯化的高活性T7 RNA聚合酶，用于体外高效合成RNA分子。T7 RNA聚合酶能够特异性识别T7启动子序列，并以DNA为模板，催化核糖核苷酸（NTP）聚合形成与模板互补的RNA链。Hi T7 RNA聚合酶相比天然T7 RNA聚合酶，具有更高的转录活性与稳定性，可实现RNA的高产合成，通常每微克模板DNA可合成大量的RNA（可达数百微克）。该酶适用于多种体外RNA合成场景，如RNA结构与功能研究、RNA干扰（RNAi）实验、体外翻译系统、RNA疫苗研发、RNA探针制备等。它操作简便，在合适的缓冲体系与温度条件下（通常37℃）即可高效进行转录反应，合成的RNA纯度高、完整性好，为体外RNA合成提供了高效可靠的工具。
产品特点
转录效率高：每微克模板DNA可合成数百微克RNA，转录产量是普通T7酶的2-5倍。

转录长度长：可合成长达10kb的RNA转录本，满足长链RNA的实验需求。

特异性强：仅识别T7启动子序列，转录特异性高，无杂带。

产物质量好：合成的RNA纯度高、完整性好，可直接用于体外翻译、RNAi、结构研究等实验。

反应条件温和：在37℃条件下即可高效转录，无需特殊的反应条件。
操作步骤

一、样本准备

取1-5mL漱口水样本转移至15mL离心管中，12000rpm离心10分钟，弃上清，收集细胞沉淀。

二、细胞裂解

向离心管中加入200~400μL细胞裂解液，再加入15~20μL蛋白酶K溶液

涡旋震荡10秒充分混匀，将离心管放入75℃恒温震荡器中，900rpm恒温震荡裂解45分钟

裂解完成后短暂离心，将上清液转移至新的离心管中

三、DNA吸附

向裂解上清中加入等体积的结合缓冲液，轻轻颠倒混匀

将混合液全部转移至一次性吸附柱中，12000rpm离心30秒，弃收集管中的废液

向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心30秒，弃废液；重复此漂洗步骤1次

四、DNA洗脱

将吸附柱放回收集管，12000rpm离心2分钟，彻底去除残留漂洗液

将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中，向吸附柱中心加入50~100μL洗脱缓冲液（可预热至65℃提升洗脱效率）

室温静置2分钟，12000rpm离心1分钟，离心管中的液体即为提取完成的基因组DNA

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使用建议

溶解与保存：建议以液体形式保存于-20℃，避免反复冻融。

反应条件：常规反应温度为37℃，灭活需50℃处理5分钟。

推荐用量：根据实验体系优化，通常每50μL反应体系添加0.1-1U。