胰酶细胞消化液 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：Trypsin Cell Digestion Solution
作用机制：含有胰蛋白酶与EDTA，可分解细胞间的蛋白质连接，使贴壁细胞从培养瓶或培养板上脱落；EDTA可螯合细胞外的钙离子，增强胰蛋白酶的消化效果；常用于细胞传代、细胞收集等实验。 

适用样本：贴壁细胞的消化与传代，适用于动物细胞、肿瘤细胞等的培养与传代。
产品概述
胰酶细胞消化液是一种用于细胞培养的消化试剂，主要成分是胰蛋白酶，还含有EDTA等辅助成分，用于贴壁细胞的消化传代。胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，能够特异性地水解细胞与细胞之间、细胞与培养底物之间的蛋白质连接，使贴壁生长的细胞从培养瓶或培养板表面脱落下来，形成单细胞悬液，便于细胞的传代培养、计数、接种等操作。EDTA（乙二胺四乙酸）能够螯合细胞表面的钙离子，增强胰蛋白酶的消化作用。胰酶细胞消化液通常为无血清或低血清配方，避免了血清对胰蛋白酶活性的抑制。使用时，将消化液加入到培养容器中，孵育一定时间后，通过轻轻摇晃培养容器使细胞脱落，然后加入含血清的培养基终止消化反应。胰酶细胞消化液是细胞培养实验室中常用的试剂，为贴壁细胞的常规培养与实验操作提供了必要的工具。
产品特点
消化效率高：胰蛋白酶和EDTA协同作用，快速消化贴壁细胞，使细胞完全脱落。

细胞损伤小：采用低浓度配方，温和消化细胞，保持细胞活性和完整性。

无血清配方：不含血清，避免了血清对胰蛋白酶活性的抑制，消化效果更稳定。

使用方便：直接加入培养瓶即可，无需提前处理，实验流程简便。

适用性广：适合大多数贴壁细胞系的消化传代，包括肿瘤细胞、正常细胞等。
操作步骤

样本处理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取试剂，再加入500μl血清或血浆样本，漩涡振荡30秒充分混匀

初步分离：13000rpm离心5分钟，将上清约1ml转移至新的2ml EP管中，加入1ml异丙醇，上下颠倒混合均匀

柱式吸附：将混合液分三次加入吸附柱（每次约700μl），13000rpm离心15秒，倒掉过柱液

洗涤纯化：

向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液

向吸附柱中加入500μl无水乙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液

干燥柱体：吸附柱13000rpm空离心2分钟，去除残留乙醇，室温放置2分钟使乙醇完全挥发

RNA洗脱：在吸附柱滤芯中央加入30μl RNase-Free TE缓冲液，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，收集滤液即为提取的miRNA产物

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注意事项

样本处理：

血浆抗凝剂建议使用EDTA或柠檬酸钠，避免使用肝素（会抑制PCR检测）

样本应避免反复冻融，新鲜样本建议尽快处理

试剂使用：

miRNA提取试剂含有胍盐，具有强烈腐蚀性，操作时需佩戴防护眼镜、手套和口罩

自备试剂需确保无RNase污染，避免影响RNA完整性

实验操作：

所有操作需在无RNase环境中进行，使用RNase-Free的枪头和离心管

离心过程需确保离心管盖紧，避免液体渗漏

产物检测：

由于血清/血浆中miRNA含量极低，提取产物浓度通常在5ng/μl以下，难以用常规NanoDrop测量，建议直接取10μl进行下游反转录实验

为获得更可靠数据，推荐使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA定量检测

产物保存：提取的miRNA产物可立即用于下游实验，或分装后置于-80℃长期保存，避免反复冻融