组织细胞microRNA提取试剂盒 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：Tissue/Cell microRNA Extraction Kit
作用机制：采用特殊的裂解液，破碎组织或细胞样本，释放microRNA；结合硅胶膜或磁珠吸附技术纯化microRNA，去除样本中的基因组DNA、蛋白质等杂质；试剂盒含RNase抑制剂，可有效防止microRNA降解。 

适用样本：新鲜或冻存的组织样本、培养细胞中的microRNA提取，适用于基因表达分析、疾病诊断、基因调控研究等实验。
产品概述
组织细胞microRNA提取试剂盒是一款用于从组织或细胞样本中提取microRNA（miRNA）的专用试剂盒。miRNA在组织细胞中参与基因表达调控，对细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程具有重要作用。组织细胞样本中含有大量的mRNA、rRNA、蛋白质、多糖等杂质，这些杂质会干扰miRNA的提取与后续实验。该试剂盒针对组织细胞样本的特性，优化了裂解与纯化体系，采用了特异性的miRNA吸附材料与有效的杂质去除试剂，可高效裂解组织细胞，释放miRNA，同时去除杂质对miRNA的影响，保护miRNA不被降解。它通常包含裂解液、结合缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液及miRNA特异性吸附柱等组分，操作流程简便，提取的miRNA纯度高、完整性好，可直接用于qPCR、Northern Blot、miRNA测序、miRNA芯片分析等实验，为组织细胞中miRNA的功能研究、基因表达调控分析、疾病机制研究等提供了重要的工具。
产品特点
组织细胞专用：针对组织细胞样本中miRNA含量低、杂质多的特点优化，提取效率高。

miRNA完整性好：采用温和裂解技术，有效保护miRNA不被降解，提取的miRNA完整性高。

纯度达标：去除了蛋白质、DNA、多糖等杂质，提取的miRNA纯度高，适合下游实验。

样本用量少：仅需10mg组织或1×10⁶细胞即可获得足够的miRNA用于下游实验。

操作简便：离心柱式操作，无需酚氯仿抽提，实验流程标准化。
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）