Recombinant Human RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS 新品

重组表达原理：

基因克隆‌：从牛基因组中获取CST3基因的编码序列（对应氨基酸31–148），插入含有启动子、筛选标记和His标签序列的质粒载体。

宿主表达‌：将重组质粒转化至E. coli（如BL21菌株），在IPTG诱导下启动蛋白表达。该系统成本低、表达效率高，适合大规模生产。

蛋白纯化‌：利用His标签与镍柱亲和层析结合，实现高纯度（>95%）蛋白回收，再经透析或凝胶过滤去除杂质。

冻干保存‌：加入海藻糖作为保护剂，冻干后可长期稳定储存，复溶后保持天然构象和生物活性。

操作要点：

电泳条件‌：使用15% SDS-PAGE凝胶，以提高对小分子量蛋白（~13.4 kDa）的分辨率。

转膜参数‌：采用湿转法，100 V、60–90分钟（4°C），使用PVDF膜（需甲醇预活化）。

抗体选择‌：

一抗：抗CST3多克隆抗体（如兔源抗体），推荐稀释比为1:1000。

二抗：HRP标记的山羊抗兔IgG，稀释比1:10,000。

显色方式‌：ECL化学发光法，预期条带位于‌~13.4 kDa‌处。

内参建议‌：由于CST3分子量较小，可选用GAPDH（~37 kDa）或β-actin（~42 kDa）作为内参，避免条带重叠。

产品概述：

该蛋白的核心价值在于模拟了真核细胞内RNA聚合酶II的“尾部”结构。这个由约52个七肽重复单元组成的CTD结构域，是转录调控的中心枢纽。其功能主要通过重复序列中多个氨基酸位点（特别是Tyr1、Ser2、Thr4、Ser5、Ser7）的动态可逆磷酸化修饰来实现。这种复杂的“CTD密码”就像一个招募平台，通过不同的磷酸化组合模式，时空特异性地招募转录起始、延伸、终止所需的因子，以及mRNA加帽、剪接、多聚腺苷酸化和核输出等RNA加工机器，从而将转录与RNA加工过程紧密偶联

 商品介绍：

产品名称：Recombinant Human RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS

种属：Human

宿主：E.Coli

表达区间：1586-1951

分子量：40.2 kDa

标签：N-terminal His Tag

性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4

纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE

应用：Western Blot, ELISA

溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存储:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

别称：DNA directed RNA polymerase II A, DNA-directed RNA polymerase II largest subunit RNA polymerase II 220 kd subunit, DNA-directed RNA polymerase II subunit A, DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB1, DNA-directed RNA polymerase III largest subunit, hRPB220, hsRPB1, POLR2, Polr2a, POLRA, Polymerase (RNA) II (DNA directed) polypeptide A, Polymerase (RNA) II (DNA directed) polypeptide A 220kDa

使用前准备：

离心处理

冻干粉在运输过程中可能附着于管壁或管盖，开盖前应先进行离心，确保粉末沉降至管底。

建议条件：3000–3500 rpm 离心 5 分钟

若无高速离心机，可适当延长低速离心时间

平衡温度

将冻干粉缓慢恢复至室温（避免加热加速溶解），防止因温差导致管内冷凝水影响蛋白稳定性

溶解（Reconstitution）

溶解液选择

推荐使用无菌蒸馏水或 PBS（pH 7.4）进行复溶

若用于细胞实验，可选用含 0.1% BSA 的缓冲液以增强稳定性

配制浓度

将冻干粉溶解至终浓度 ?0.1–1.0 mg/mL，此范围适用于大多数实验场景

浓度过高可能导致蛋白聚集，过低则易失活

混匀方式

使用移液枪头轻轻吹打数次，或上下轻柔颠倒混匀

严禁使用涡旋振荡器，以免破坏蛋白空间结构，导致活性丧失

冻干粉：储存于-20°C至-80°C，避免反复冻融。

复溶后：储存于2°C至8°C，有效期约1个月；长期存储建议分装后置于-20°C至-80°C。

复溶方法：

离心处理：使用前离心收集冻干粉于管底。

复溶缓冲液：加入无菌PBS（含0.1% BSA）或去离子水，轻轻吹打混匀，避免涡旋震荡。

浓度建议：复溶后蛋白浓度保持在0.1-1.0 mg/mL，分装保存以减少冻融损伤。

公司正在出售的产品：

应用范围：

免疫研究：体外评估抗病毒或抗菌免疫应答，分析炎症反应机制。

细胞培养：添加至细胞培养基中，研究其对巨噬细胞活化的影响。

功能实验：用于中和实验或信号通路研究（如JAK-STAT通路）。