Recombinant Human CrkL 新品

重组表达原理：

基因克隆‌：从牛基因组中获取CST3基因的编码序列（对应氨基酸31–148），插入含有启动子、筛选标记和His标签序列的质粒载体。

宿主表达‌：将重组质粒转化至E. coli（如BL21菌株），在IPTG诱导下启动蛋白表达。该系统成本低、表达效率高，适合大规模生产。

蛋白纯化‌：利用His标签与镍柱亲和层析结合，实现高纯度（>95%）蛋白回收，再经透析或凝胶过滤去除杂质。

冻干保存‌：加入海藻糖作为保护剂，冻干后可长期稳定储存，复溶后保持天然构象和生物活性。

操作要点：

电泳条件‌：使用15% SDS-PAGE凝胶，以提高对小分子量蛋白（~13.4 kDa）的分辨率。

转膜参数‌：采用湿转法，100 V、60–90分钟（4°C），使用PVDF膜（需甲醇预活化）。

抗体选择‌：

一抗：抗CST3多克隆抗体（如兔源抗体），推荐稀释比为1:1000。

二抗：HRP标记的山羊抗兔IgG，稀释比1:10,000。

显色方式‌：ECL化学发光法，预期条带位于‌~13.4 kDa‌处。

内参建议‌：由于CST3分子量较小，可选用GAPDH（~37 kDa）或β-actin（~42 kDa）作为内参，避免条带重叠。

产品概述：

重组人CrkL蛋白（Recombinant Human Crk-like protein, CRKL）是一种通过基因工程技术在体外表达和纯化的关键信号转导接头蛋白。作为CRK家族的重要成员，CrkL在细胞增殖、迁移及肿瘤免疫逃逸中扮演着“分子桥梁”的角色。特别是在肝细胞癌（HCC）的免疫治疗耐药研究中，CrkL被揭示为调控肿瘤微环境的关键因子，使其成为肿瘤靶向治疗的新兴热点。

 商品介绍：

产品名称：Recombinant Human CrkL

种属：Human

宿主：E.Coli

表达区间：1-303

分子量：33.2 kDa

                 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE

标签：N-terminal His Tag

性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4

纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE

应用：Western Blot, ELISA

溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存储:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

别称：Crk L, Crk like protein, Crk-like protein, Crkl, CRKL_HUMAN, Crkol, HGNC:2363, Oncogene CrkL, V crk avian sarcoma virus CT10 oncogene homolog like, v crk sarcoma virus CT10 oncogene homolog (avian) like, V crk sarcoma virus CT10 oncogene homolog avian like

使用前准备：

离心处理

冻干粉在运输过程中可能附着于管壁或管盖，开盖前应先进行离心，确保粉末沉降至管底。

建议条件：3000–3500 rpm 离心 5 分钟

若无高速离心机，可适当延长低速离心时间

平衡温度

将冻干粉缓慢恢复至室温（避免加热加速溶解），防止因温差导致管内冷凝水影响蛋白稳定性

溶解（Reconstitution）

溶解液选择

推荐使用无菌蒸馏水或 PBS（pH 7.4）进行复溶

若用于细胞实验，可选用含 0.1% BSA 的缓冲液以增强稳定性

配制浓度

将冻干粉溶解至终浓度 ?0.1–1.0 mg/mL，此范围适用于大多数实验场景

浓度过高可能导致蛋白聚集，过低则易失活

混匀方式

使用移液枪头轻轻吹打数次，或上下轻柔颠倒混匀

严禁使用涡旋振荡器，以免破坏蛋白空间结构，导致活性丧失

冻干粉：储存于-20°C至-80°C，避免反复冻融。

复溶后：储存于2°C至8°C，有效期约1个月；长期存储建议分装后置于-20°C至-80°C。

复溶方法：

离心处理：使用前离心收集冻干粉于管底。

复溶缓冲液：加入无菌PBS（含0.1% BSA）或去离子水，轻轻吹打混匀，避免涡旋震荡。

浓度建议：复溶后蛋白浓度保持在0.1-1.0 mg/mL，分装保存以减少冻融损伤。

公司正在出售的产品：

应用范围：

免疫研究：体外评估抗病毒或抗菌免疫应答，分析炎症反应机制。

细胞培养：添加至细胞培养基中，研究其对巨噬细胞活化的影响。

功能实验：用于中和实验或信号通路研究（如JAK-STAT通路）。